Introdução: Atualmente 422 milhões de adultos possuem diabetes no mundo. Segundo dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) aproximadamente 1,5 milhões de mortes foram ocasionadas pelo Diabetes Mellitus (DM) em 2012. Uma das principais alterações do diabetes é a desregulação do sistema imune, ocasionando a liberação de citocinas pró-inflamatórias, em especial a interleucina 1-beta (IL1-β). Para que ocorra a maturação da Il-1β é necessária a ativação do inflamassoma em especial o NLRP3, onde no coração e em diabetes é um dos mais estudado. Para que ocorra a síntese e maturação da IL1- β são necessários dois sinais: O sinal 1 que é responsável pela transcrição da pro- IL1-β e o sinal 2 que é dado através da oligomerização das proteínas NLRP3, ASC e Caspase-1, levando a clivagem da pro- IL1-β para IL1-β, sua forma madura. Ainda não está bem elucidado qual o sinal que induz ativação do NLRP3, entretanto diferentes candidatos já foram propostos, dentre eles as catepsinas.

Objetivo: testar a hipótese de que as catepsinas estão envolvidas nos mecanismos do remodelamento elétrico cardíaco no DT1, através da participação no processo de síntese e maturação de IL1B.

Métodos: Serão utilizados camundongos C57BL/6 divididos em 6 grupos: WT, WT + stz, Cts b^-/-, Cts b^-/- + stz, Cts L^-/-, Cts L^-/- + stz. Os grupos diabéticos serão tratados por 5 dias consecutivos com 50mg/kg de estreptozotocina. Será considerado diabético o animal com glicemia igual ou superior a 250 milimol/l. Após 8 semanas os animais serão submetidos a 15 dias de tratamento com Ca074Me (bloqueador de catepsina) e no 75° dia serão realizadas as análises. Em todos os grupos serão realizados ECG nas semanas zero, oito e ao final do tratamento tendo análise dos parâmetros RR, PR, QT, QTc e QRS. O estudo do potencial arritmogênico também será avaliado com intuito de Identificar os tipos de arritmias, quantificação de eventos e duração.

(Cafeína 120 mg/kg e dobutamina 50ug/kg). No estudo do potencial de ação as características como: amplitude, duração, potencial de repouso, presença ou ausencia de pós potenciais. Para identificação dos mecanismos moleculares e principais vias de sinalização as técnicas de PCR (KCNH2, KCND3 e KCNQ1), Western Blot (IL1β, Cts B, Cts S e Cts L), para avaliar a concentração sérica de IL1β será utilizada a técnica de ELISA, através da técnica de Imunofluorescência avaliaremos a ativação de NLRP3 em macrófagos cardíacos. Camundongos C57BL/6 foram induzidos com tioglicolato através de injeção intraperitoneal e após 72 horas os macrófagos foram extraídos e quantificados na proporção de aproximadamente 1.0 x 10⁶. As células foram plaqueadas em placas de 96 poços na presença de RPMI 1640 com 200 nM L-glutamina 0.6 ug/ml de penicilina e 60 mg/ml de estreptomicina, 10% FCS,10 ng/ml GM-CSF e 10 ng/ml de M-CFS. Para a o pré tratamento de liberação de de ATP, os macrófagos foram incubados a 37°C na presença de bloqueadores: cytochalasin D (1 mg/ml), Ca-074Me (12.5 mM), Leupeptin (25uM) por 2 horas, após a estimulação a placa é lavada com PBS. Após a lavagem as células são incubadas com de Pam3cys (1 ug/ml) por 3 horas e após mais 2 horas de estimulação com ATP. Após o ensaio o sobrenadante é coletado e as concentrações de Il1β serão determinadas por um kit comercial de ELISA.

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